疫情的不可控制，防不胜防，让新冠疫苗研发走上了巅峰时刻。其中不得不提的就是爆款ivd原料-----t7 rna polymerase。
1
什么是t7 rna polymerase？
t7rna聚合酶（英语：t7 rna polymerase）是一种rna聚合酶，分子量约99kda。专门催化5'→3'方向的rna形成过程。该酶对t7启动子具有高度特异性，不识别其它生物来源的启动子。
t7 rna polymerase能以含有t7启动子序列的双链dna为模板，以ntps为底物，合成与启动子下游单链dna互补的rna，因此，t7 rna polymerase常应用于体外合成长转录本和短转录本。双链线性平末端或5’突出末端dna均可作为t7 rna polymerase的转录模板，因此线性质粒、pcr产物均可用作体外合成rna的模板。
此酶在合成rna的过程中，需要dna模板与镁离子（mg2 ）作为辅因子。牛血清蛋白（bovine serum albumin，bsa）及精胺（spermidine）对此酶具促进效果。与细菌的rna聚合酶的差异之一，在于t7rna聚合酶不受抗生素立泛霉素（rifampicin）抑制。
2
t7 rna polymerase用途
用于合成单链rna以作为杂交探针，基因组dna序列分析，核糖核酸酶保护测定，反义rna合成。
作为体外翻译的rna模板，rna剪接研究的底物，rna二级结构和rna-蛋白质相互作用，核酸扩增分析。
体外合成dsrna、sirna、mirna等rna。
可以识别修饰的核苷酸，例如生物素标记、荧光素标记、放射性同位素、地高辛标记dntp，用于各种标记rna的合成，进行下游实验。
3
用于体外合成转录本
常见问题及米乐体育官方的解决方案
1
转录产物产量低
模板的质量与产量密切相关，实验组产量明显低于对照组可能原因有：
①实验模板中有抑制反应成分；
②实验模板本身原因。
建议：
①重新纯化模板；
②确定模板定量以及其完整性；
③延长反应时间；
④加大模板投入量；
⑤尝试其它的启动子和rna聚合酶。
2
短转录本产量低
转录起始片段短会抑制反应，转录产物小于100nt 时，延长反应时间至 4-8 小时或增加模板量至2ug可以提高rna产量。
3
rna 转录长度大于预期
建议：
①检查模板是否完全线性化，如有必要，额外进行线性化；
②选择合适的限制性内切酶，避免产生有义链3’ 端突出，或者用 klenow fragment 或 t4 dna 聚合酶补齐后，再进行转录；
③使用变性胶检测rna 产物。
4
rna 转录长度小于预期
如果电泳显示产物条带小于预期大小，可能原因：
①模板包含类似于t7 rna聚合酶的终止序列；
②模板中gc含量高。
建议：
①降低反应温度（比如，30℃），有时降低温度可以增加转录长度，但会降低产量。或者尝试不同的 rna 聚合酶进行转录；
②若模板gc含量高，采用 42℃进行转录反应，或者添加 ssb 提高产量及转录长度。
5
转录产物电泳拖尾
电泳过程中有拖尾现象，可能原因：
①实验操作过程被rnase污染；
②dna模板被rnase污染。
建议：
①实验过程中使用rnase-free的枪头和ep管，佩戴一次性乳胶手套和口罩，所有试剂均用rnase-free h2o配制。
② 重新纯化模板 dna。
本文摘自---药精通 bio